|
|
The Interaction of Borrelia Outer Surface Proteins with Tick Salivary Proteins
PAKTAN, Aylin
The aim of this thesis was to investigate the interaction of the salivary gland protein, Salp15, in relation to the outer surface protein C, OspC, using in silico analysis, as well as trying to amplify Salp15 from different tick species found in same geographical areas and observing the growth of Borrelia in the midgut and salivary glands of these different tick species in vitro.
|
|
|
Hafnium Chloride, an Alternative Staining Reagent for Biological Electron Microscopy
BARANYI, Magdalena Victoria
This study focuses on the staining pattern of the non-radioactive heavy metal EM stain HfCl4, used during freeze substitution specimen preparation. HfCl4 was investigated as an alternative for the prominent uranyl acetate, since uranium based materials have been placed under heavy restrictions and bans worldwide. We have found a strong HfCl4 staining pattern of microtubules in myoepithelial cells of Ixodes ricinus salivary glands. Additionally, in several samples, HfCl4 was found to completely fill the cytoplasm of the myoepithelial cells. Nonetheless, artefact formation around granulated cells was also experienced.
|
|
|
Exploration of the tick-Borrelia molecular interactions by employing the transcriptomic approaches
MAHMOOD, Sazzad
Along with climate change and increased sharing of habitat, ticks are coming into more frequent contact with humans. The hard tick Ixodes scapularis and Ixodes ricinus are known disease vectors in Northern America and Europe, respectively. Along with many other pathogenic microorganisms, these ticks spread Borrelia sp. by ectoparasitic blood feeding. Borrelia afzelii is the major European Lyme disease pathogen spread by I. ricinus. Our study focuses on differential gene expression in I. ricinus salivary gland and midgut, induced in the nymphal stage by B. afzelii infection. Tick genes upregulated by infection are considered to play essential roles for the acquisition, persistence, and transmission of Borrelia. We have determined 32,897 full length sequences of tick mRNA from B. afzelii infected/noninfected tick salivary glands and the whole body. In addition, we have obtained MACEseq (Massive Analysis of cDNA Ends) from both midgut and salivary glands while the nymphs were non-infected or infected with B. afzelii during three different phases of blood-feeding. From the MACE database, we obtained 250-500 bp 3'-end sequences with raw quantitative expression values. Total reads, unique sequences and protein coding tick genes from midgut samples were 38,199,641, 88,825 and 24,276, and from salivary gland were 74,651,134, 93,096 and 26,179, respectively. After filtering, using several criteria, expression was validated by qPCR. Hence, the validated genes may most likely interact with Borrelia in its acquisition, persistence, or transmission to the vertebrate host. In our study, RNA interference approaches and vaccination were implemented in order to investigate the impact of upregulated tick midgut and salivary gland genes on Borrelia transmission to C3H mice.
|
|
|
Glykoproteiny ve slinách krevsajících členovců
Sumová, Petra ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Mikeš, Libor (oponent)
Krevsající členovci injikují během sání krve obsah svých slinných žláz do hostitele. Sliny krevsajících členovců obsahují celé spektrum bioaktivních makromolekul, jejichž hlavní funkcí je umožnění sání krve. Proti řadě těchto molekul je ovšem namířena protilátková odpověď hostitelského imunitního systému. Detekce této protilátkové odpovědi může, díky mezidruhovým odlišnostem v proteinovém složení slin, sloužit jako měřítko expozice hostitele jednotlivým druhům krevsajících členovců. Molekulami vyvolávajícími protilátkovou odpověď mohou být proteiny nebo glykoproteiny. Glykoproteiny jsou proteiny, na něž jsou glykosidicky vázány oligosacharidové řetězce. Za antigenní vlastnosti slinných glykoproteinů mohou být zodpovědné obě jejich složky, či pouze cukerná nebo proteinová část. Tuto skutečnost je třeba zohlednit při výběru expresního systému pro syntézu rekombinantních glykoproteinů. Tato práce shrnuje poznatky o struktuře, funkci a vlastnostech slinných glykoproteinů různých druhů krevsajících členovců.
|
|
|
Characterization and antigenic properties of salivary yellow-related proteins in phlebotomine sand flies
Cikrtová, Petra
3 ABSTRAKT Yellow-related proteiny (YRP) tvoří početnou rodinu proteinů, jejíž členové byli identifikováni v transkriptomech slinných žláz všech dosud studovaných druhů flebotomů. Tato rodina je zařazena do skupiny tzv. MRJP/Yellow proteinů, které se vyskytují u hmyzu i některých dalších organismů. Přestože tyto proteiny sdílejí podobnou terciární strukturu tvořenou šestiramenným beta-propelerem s centrálně umístěným tunelem, liší se ve svých funkcích. Struktura a amin-vázající vlastnosti YRP flebotomů byly popsány pouze na základě jediné studie u druhu Lutzomyia longipalpis. V naší práci jsme namodelovali struktury celkem 32 YRP ze slinných žláz 13 druhů flebotomů. Zatímco celkový tvar a struktura všech proteinů byla obdobná, jednotlivé YRP se mezi druhy i v rámci jednoho druhu odlišovaly zejména v povrchovém náboji, vlastnostech tunelu a v aminokyselinovém složení vazebného místa pro biogenní aminy. Tyto modifikace ukazují na rozdílné funkce jednotlivých proteinů, jež byly experimentálně potvrzeny ve druhé části našeho projektu. Zaměřili jsme se na vazebné vlastnosti YRP druhů Phlebotomus perniciosus a P. orientalis, kteří jsou důležitými přenašeči prvoků rodu Leishmania. Síla vazby pro serotonin, histamin a katecholaminy se lišila jak mezi druhy, tak v rámci obou proteinů každého druhu. Přes tyto...
|
|
|
Characterization and antigenic properties of salivary yellow-related proteins in phlebotomine sand flies
Cikrtová, Petra
3 ABSTRAKT Yellow-related proteiny (YRP) tvoří početnou rodinu proteinů, jejíž členové byli identifikováni v transkriptomech slinných žláz všech dosud studovaných druhů flebotomů. Tato rodina je zařazena do skupiny tzv. MRJP/Yellow proteinů, které se vyskytují u hmyzu i některých dalších organismů. Přestože tyto proteiny sdílejí podobnou terciární strukturu tvořenou šestiramenným beta-propelerem s centrálně umístěným tunelem, liší se ve svých funkcích. Struktura a amin-vázající vlastnosti YRP flebotomů byly popsány pouze na základě jediné studie u druhu Lutzomyia longipalpis. V naší práci jsme namodelovali struktury celkem 32 YRP ze slinných žláz 13 druhů flebotomů. Zatímco celkový tvar a struktura všech proteinů byla obdobná, jednotlivé YRP se mezi druhy i v rámci jednoho druhu odlišovaly zejména v povrchovém náboji, vlastnostech tunelu a v aminokyselinovém složení vazebného místa pro biogenní aminy. Tyto modifikace ukazují na rozdílné funkce jednotlivých proteinů, jež byly experimentálně potvrzeny ve druhé části našeho projektu. Zaměřili jsme se na vazebné vlastnosti YRP druhů Phlebotomus perniciosus a P. orientalis, kteří jsou důležitými přenašeči prvoků rodu Leishmania. Síla vazby pro serotonin, histamin a katecholaminy se lišila jak mezi druhy, tak v rámci obou proteinů každého druhu. Přes tyto...
|
|
|
Korelace imunohistochemických a molekulárně biologických metod v diagnostice nádorů slinných žláz
Horáková, Markéta ; Skálová, Alena (vedoucí práce) ; Laco, Jan (oponent) ; Dušková, Jaroslava (oponent)
Doktorská disertační práce se zabývá korelací morfologického, imunohistochemického a molekulárně-genetického nálezu v maligních nádorech slinných žláz. V první části jsou shrnuty současné poznatky týkající se salivárních malignit. V druhé části je prezentován vlastní výzkum. Druhá polovina disertační práce se týká přímo výsledků vlastního výzkumu a je rozdělena do tří částí. V první části je představena metoda "dvoustupňového screeningu" maligních nádorů, který má za cíl nalézt nové, doposud nepopsané genové aberace se zaměřením na zhoubné nádory slinných žláz. Tato metoda probíhá ve dvou na sebe navazujících krocích, kdy je materiál nejdříve vyšetřen imunohistochemicky směsí protilátek nespecificky detekující aberace v genech NTRK1-3, ALK a ROS1. Pozitivní případy jsou dále podrobeny vysoce senzitivnímu i specifickému molekulárně-genetickému vyšetření metodou masivního paralelního sekvenování s použitím Archer kitu. V druhé části výsledků je vypracován postup pro cytologickou diagnostiku sekrečního karcinomu slinných žláz z tenkojehlové aspirace (FNA). V této části je detailně popsána cytomorfologie sekrečního karcinomu v nátěrech obarvených dle Papanicolaoua i v cytobloku, ze kterého jsou následně provedena doplňková imunocytochemická a genetická vyšetření. Výsledky dostupných vyšetření jsou dány...
|
|
|
Diferenciální exprese transkriptů slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
KROPÁČKOVÁ, Sára
Klíšťata využívají různé mechanismy k potlačení hostitelské imunity. V této práci jsem porovnala expresi deseti transkriptů z klíštěcích slinných žláz, které jsou exprimované více při sání na hostiteli s aktivními imunitními reakcemi, v porovnání se sáním na systému umělého sání. Dále jsem zkoumala antikomplementový protein 1, AC1. Připravila jsem sérum se specifickými protilátkami a zkoumala expresi tohoto proteinu při sání na různých hostitelích a v nymfách. Také jsem testovala kovalentní interakce rekombinantu AC1 s proteiny z krevní plazmy hostitele. Tato studie napomáhá pochopení regulace exprese během sání klíštěte a přibližuje některé klíštěci slinné proteiny.
|
|
|
Glykoproteiny ve slinách krevsajících členovců
Sumová, Petra ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Mikeš, Libor (oponent)
Krevsající členovci injikují během sání krve obsah svých slinných žláz do hostitele. Sliny krevsajících členovců obsahují celé spektrum bioaktivních makromolekul, jejichž hlavní funkcí je umožnění sání krve. Proti řadě těchto molekul je ovšem namířena protilátková odpověď hostitelského imunitního systému. Detekce této protilátkové odpovědi může, díky mezidruhovým odlišnostem v proteinovém složení slin, sloužit jako měřítko expozice hostitele jednotlivým druhům krevsajících členovců. Molekulami vyvolávajícími protilátkovou odpověď mohou být proteiny nebo glykoproteiny. Glykoproteiny jsou proteiny, na něž jsou glykosidicky vázány oligosacharidové řetězce. Za antigenní vlastnosti slinných glykoproteinů mohou být zodpovědné obě jejich složky, či pouze cukerná nebo proteinová část. Tuto skutečnost je třeba zohlednit při výběru expresního systému pro syntézu rekombinantních glykoproteinů. Tato práce shrnuje poznatky o struktuře, funkci a vlastnostech slinných glykoproteinů různých druhů krevsajících členovců.
|
|
|
Hyaluronidáza ve slinách ovádů a klíšťat
Tothová, Viktorie ; Volf, Petr (vedoucí práce) ; Mikeš, Libor (oponent)
6 1. Abstrakt Hyaluronidázy jsou významnou skupinou enzymů odpovědných za štěpení kyseliny hyaluronové, která je jednou z hlavních složek pojivové tkáně obratlovců. U většiny krevsajících členovců je tento enzym přítomen ve slinách a usnadňuje sání tím, že se podílí na průniku kůží a zvětšení potravní léze v místě bodnutí. Vzniklé fragmenty extracelulární matrix mohou navíc modulovat lokální imunitní odpověď hostitele a zvyšovat pravděpodobnost přenosu patogenů. V naší práci jsme se zaměřili na průkaz hyaluronidázové aktivity u klíštěte Ixodes ricinus (Acari: Ixodidae) a zástupců čtyř rodů ovádů (Diptera: Tabanidae). V slinných žlázách klíšťat se hyaluronidázovou aktivitu detekovat nepodařilo. Naopak, ve slinných žlázách ovádů jsme prokázali velmi silnou aktivitu u všech studovaných druhů a dále ji charakterizovali biochemickými a elektroforetickými metodami. Hyaluronidázy ovádů štěpí hyaluronan i chondroitin sulfát; enzymy jednotlivých druhů se mírně liší molekulovou hmotností, pH optimem a citlivostí k redukujícím podmínkám. Abstract (in English) Hyaluronidases are an important group of enzymes responsible for cleaving hyaluronic acid, which is a major component of the extracellular matrix of vertebrates. In bloodsucking arthropods these enzymes are frequently present in saliva. Salivary hyaluronidases...
|
host ::
RSS.